GB4789.2-2016 食品微生物學檢驗菌落總數測定
發布時間：
2022-11-16
作者：
山東日水生物
GB 4789.2-2016 食品微生物學檢驗菌落總數測定
一、菌落總數的定義
食品檢樣經過處理,在一定條件下(如培養基、培養溫度和培養時間等)培養后,所得每g(ml)檢樣中形成的微生物菌落總數.
在GB4789.2-2016的培養條件下所得結果,只包括一群在平板計數瓊脂上生長發育的嗜中溫需氧菌或兼性厭氧菌的菌落總數.
注意:有的平板計數瓊脂上長一片霉菌,則此次試驗結果作廢,需重新檢測(霉菌屬于真菌類,它產生的霉菌毒素抑制普通菌的生長,所以若有一大片霉菌生長需重新檢測,并清理實驗室.)
二、菌落總數測定的衛生學意義
檢測食品本身的新鮮程度和加工、貯存運輸過程中是否受到污染.
必須配合大腸菌群的檢驗和其他病原菌項目的檢驗,才能作出比較全面準確的判定.
三、2016版國家標準的主要變動
拍擊式均質:方便,只需購置一次性無菌均質袋；快捷,1-2min內完成均質；科學,均質過程中不會產生高溫；均質均勻,可使樣品菌完全稀釋出來；此方法不適合均質堅硬樣品,如魚骨類樣品.
培養基:平板計數瓊脂
平板計數瓊脂PCA
2010版和2016版
胰蛋白胨5.0g
酵母浸膏2.5g
葡萄糖1.0g
瓊脂15.0g
蒸餾水1000ml
營養瓊脂NA
2003版
蛋白胨10.0g
牛肉膏3.0g
氯化鈉5.0g
瓊脂15.0g
蒸餾水1000ml
培養基改變依據:國外食品微生物檢驗的權威方法(ISO、FDA、AOCAC)均采用PCA,它的營養更優化.
計數和報告:平板和菌落選取原則
選取每個平皿菌落數在30-300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板進行計數.每個稀釋度的菌落數應采用兩個平板的平均數.
有較大片狀生長菌落的平板不易采用.
如片狀菌落不足平板一般,而另一半平板菌落分布均勻,可計分布均勻的一半,再乘以2.
如平板上出現菌落間無明顯界限的鏈狀生長時,則每條單鏈作為一個菌落計算.
計數和報告:菌落總數計算方法
如果只有一個稀釋度平板的菌落數在30-300CFU適宜范圍內,則計算該稀釋度兩個平板菌落平均數,再乘以稀釋倍數,作為每g(ml)樣品中菌落總數結果.
若有兩個連續稀釋度的平板菌落數均在30-300CFU適宜范圍內,按公式N=∑C/(n1+0.1n2)d計算.N:樣品中菌落數,∑C:含適宜范圍CFU的平板菌落數之和,n1:第1稀釋度(低稀釋度)平板個數,n2:第二稀釋度(高稀釋度),d:稀釋因子(第1稀釋度).
所有平板菌落數均＞300,計最gao稀釋度平板的平均菌落數.
所有平板菌落數均＜30,計最di稀釋度平板的平均菌落數.
樣品原液和所有稀釋度平板均無菌生長,以＜1乘以最di稀釋倍數計算.
所有稀釋度平板菌落數均不在30-300之間,有些＜30,有些＞300,則最接近30-300的平均菌落數乘以稀釋倍數計算.
計數和報告-結果報告(采取四舍五入法)
五、其他注意事項
1.如樣品(干調、面粉、脫水蔬菜)中可能含有在瓊脂表面蔓延生長的菌落,可在凝固后的瓊脂表面再覆蓋一層(4ml)培養基.這樣可以有效防止菌落蔓延的現象出現.
2.稀釋液選擇:
3.磷酸鹽緩沖液:適用于偏酸或偏堿性樣品的稀釋.
生理鹽水:適用于常規樣品的稀釋.
3.傾注平板計數瓊脂在15-20ml,一般要求達到18ml以上,即瓊脂高度＞3mm.若傾注的培養基太薄,菌需要的營養成分不夠,使菌生長的不完好,不便于觀察結果.
4.樣品與培養基一定要混合均勻,建議混勻方法:上下搖晃-左右搖晃-順時針搖晃-逆時針搖晃.若混合不均勻,有的菌落會長到平板邊緣,不便于觀察,影響最終結果.
5.培養基水浴溫度和傾注溫度在46±1℃.培養基的冷卻方法:要在恒溫水浴鍋中通過水來冷卻；不可直接放到試驗臺或地面上冷卻,因這樣培養基底部容易先凝固,傾注培養基時,有凝固塊到處,導致培養基有結塊,即不美觀,又影響觀察結果.
6.培養條件:一般樣品36±1℃培養48±2h,水產品(指原生態、未經過加工的水產品原料),它的培養溫度要接近原生態的溫度,即30±1℃,培養72±3h.
7.樣品稀釋液有時會帶有細碎的食物顆粒(如奶粉、堅果),為避免這些顆粒與菌落發生混淆,可將樣品稀釋液與PCA混合,單做培養,置于4℃冰箱放置同樣時間,以便在計數時作為對照.(營養瓊脂可加紅四氮唑來區別菌和顆粒,一般不建議使用)
8.必須做空白對照:檢測培養基、平皿、稀釋液的無菌程度.同時,應在工作臺內打開一塊空白PCA(其暴露時間應與檢樣時間相當),以了解樣品在檢驗過程中有無受到來自環境的污染.
