掌握微生物實驗細菌的單染色法的研究

發布時間：

2022-11-16

作者：

國內細菌微生物培養基生產企業

細菌的單染色法的研究

一、基本原理

所謂單染色法是利用單一染料對細菌進行染色的一種方法.此法操作簡便,適用于菌體一般形態的觀察.

在中性、堿性或弱酸性溶液中,細菌細胞通常帶負電荷,所以常用堿性染料進行染色.堿性染料并不是堿,和其他染料一樣是一種鹽,電離時染料離子帶正電,易與帶負電荷的細菌結合而使細菌著色.例如,美藍(亞甲藍)實際上是氯化亞甲藍鹽(methylenebluechloride,縮寫為MBC),它可被電離成正、負離子

MBC→methylene blue++chloride-

帶正電荷的染料離子可使細菌細胞染成藍色.常用的堿性染料除美藍外,還有結晶紫(crystal violet)、堿性復紅(basicfu-chsin)、番紅(又稱沙黃,safranine)等.

細菌體積小,較透明,如未經染色常不易識別,而經著色后,與背景形成鮮明的對比,使易于在顯微鏡下進行觀察.

二、實驗器材

顯微鏡,酒精燈,載玻片,接種環,雙層瓶,擦鏡紙,生理鹽水;

呂氏堿性美藍染色液,石炭酸復紅染色液;

金黃色葡萄球菌,枯草芽孢桿菌.

三、實驗操作步驟

步驟1：涂片取兩塊干凈的載玻片,各滴一小滴生理鹽水于載玻片中央,用無菌操作,分別挑取金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌于二載玻片的水滴中(每一種菌制一片),調勻并涂成薄膜.注意滴生理鹽水時不宜過多,涂片必須均勻.

步驟2.干燥于室溫中自然干燥.

步驟3.固定涂片面向上,于火焰上通過2至3次,使細胞質凝固,以固定細菌的形態,并使其不易脫落.但不能在火焰上烤,否則細菌形態將毀壞.

步驟4.染色放標本于水平位置,滴加染色液于涂片薄膜上,染色時間長短隨不同染色液而定.呂氏堿性美藍染色液約染2至3分鐘,石炭酸復紅染色液約染1至2分鐘.