標準菌株驗證鑒定操作步驟實驗
發布時間：
2022-11-16
作者：
標準菌株驗證鑒定步驟
菌種活化:干粉標準菌株標準貯備菌株工作菌株;
金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌標準菌株:挑取部分干粉溶解于0.9%無菌氯化鈉溶液中,劃線接種于營養瓊脂平板上,36±1培養18至24小時.并觀察菌落形態.
金黃色葡萄球菌:菌落凸起,圓形,不透明;大腸埃希氏菌:菌落稍凸,圓形,濕潤,乳白色;銅綠假單胞菌:菌落扁平,圓形,邊緣不整齊,光滑濕潤,可產生藍綠或黃綠色素;枯草芽孢桿菌:表面粗糙不透明,鏡檢菌體有芽孢.
金黃色葡萄球菌:菌落凸起,圓形,不透明;大腸埃希氏菌:菌落稍凸,圓形,濕潤,乳白色;銅綠假單胞菌:菌落扁平,圓形,邊緣不整齊,光滑濕潤,可產生藍綠或黃綠色素;枯草芽孢桿菌:表面粗糙不透明,鏡檢菌體有芽孢.
白色念珠菌:挑取部分干粉溶解于0.9%無菌氯化鈉溶液中,劃線接種于改良馬丁瓊脂培養基平板或PDA瓊脂平板上,30至35培養24至48小時.本菌細胞呈卵圓形,很象酵母菌,比葡萄球菌大5至6倍,革蘭氏染色陽性,但著色不均勻.
黑曲霉:挑取部分干粉溶解于0.9%無菌氯化鈉溶液中,劃線接種于改良馬丁瓊脂斜面培養基上,23至28培養48至96小時.菌叢呈黑褐色,粗糙.
生孢梭菌:挑取部分干粉溶解于0.9%無菌氯化鈉溶液中,接種于硫乙醇酸鹽流體培養基中,30至35培養18至24小時;或在厭氧條件下接種于哥倫比亞瓊脂上,30至35厭氧培養18至24小時.
菌種鑒定:
金黃色葡萄球菌:
革蘭氏染色試驗:革蘭氏陽性菌(紫色),葡萄狀排列,球菌.
兔血漿試驗:接種1個單菌落于1支兔血漿溶液中,30至35培養至6小時,每半小時觀察一次.凝固為陽性.金黃色葡萄球菌為陽性反應.
大腸埃希氏菌:
革蘭氏染色試驗:革蘭氏陰性桿菌,紅色.
IMVC生化試驗:
銅綠假單胞菌:
革蘭氏染色試驗:革蘭氏陰性桿菌,紅色.
氧化酶試驗:將氧化酶試紙用蒸餾水浸濕,用細玻璃棒或一次性接種針挑取單個菌落,涂在試紙上.在60s內變為藍色或藍紫色為陽性,不變色為陰性.
綠膿菌素試驗:取斜面培養物接種于PDP瓊脂培養基斜面上,培養24小時,加三氯甲烷3至5ml至培養管中,攪碎培養基并充分振搖.靜置片刻,將三氯甲烷相移至另一試管中,加入1mol/L鹽酸試液約1ml,振搖后,靜置片刻,觀察.若鹽酸溶液呈粉紅色,為綠膿菌素試驗陽性,否則為陰性.本菌為綠膿菌素試驗陽性.
熒光試驗:接種于金氏B培養基(或假單胞菌產熒光色素培養基)上,36±1培養18至24小時,在366nm紫色燈下有藍綠色熒光.
枯草芽孢桿菌:
菌落形態:表面粗糙不透明,有皺摺.
鏡檢:用芽孢染色液染色,菌體有芽孢.
白色念珠菌:
革蘭氏染色試驗:呈卵圓形,很象酵母菌,比葡萄球菌大5至6倍,革蘭氏染色陽性,但著色不均勻.
念球菌顯色培養基:30至35培養24至48小時,呈綠色菌落.
產芽管試驗:挑取1%吐溫80至玉米瓊脂培養基上的培養物,接種于加有一滴血清的載玻片上,蓋上蓋玻片,置濕潤的平皿內,置35至37、1至3小時,置顯微鏡下觀察,可見到由孢子長出短小芽管.
黑曲霉:23至28培養48至96小時.菌叢呈黑褐色,粗糙,有黑色孢子產生.
生孢梭菌:
革蘭氏染色試驗:革蘭陽性梭菌,有或無卵圓形或球形的芽孢.
哥倫比亞瓊脂培養基試驗:接種于含慶大霉素的哥倫比亞瓊脂培養基平板上,置厭氧條件下培養48至72小時,應生長.
過氧化氫酶試驗:滴加3%過氧化氫試液,若菌落表面有氣泡產生,為過氧化氫酶試驗陽性,否則為陰性.本菌為陰性反應.