微生物學實驗技術:水中細菌學檢查
發布時間：
2022-11-16
作者：
微生物學實驗技術:水中細菌學檢查
I 水中細菌總數的測定
一,目的要求
l.學習水樣的采取方法和水樣細菌總數測定的方法.
2.了解水源水的平板菌落計數的原則.
二,基本原理
本實驗應用平板菌落計數技術測定水中細菌總數.由于水中細菌種類繁多,它們對營養和其他生長條件的要求差別很大,不可能找到一種培養基在一種條件下,使水中所有的細菌均能生長繁殖,因此,以一定的培養基平板上生長出來的菌落,計算出來的水中細菌總數僅是一種近似值.目前一般是采用普通肉膏蛋白胨瓊脂培養基.
三,器材
l.培養基 肉膏蛋白胨瓊脂培養基,無菌水.
2.儀器或其他用具 滅菌三角燒瓶,滅菌的帶玻璃塞瓶,滅菌培養皿,滅菌吸管,滅菌試管等.
四,操作步驟
l.水樣的采取
(1)自來水 先將自來水龍頭用火焰燒灼3分鐘滅菌,再開放水龍頭使水流5分鐘后,以滅菌三角燒瓶接取水樣,以待分析.
(2)池水,河水或湖水 應取距水面l0～15cm的深層水樣,先將滅菌的帶玻璃塞瓶,瓶口向下浸入水中,然后翻轉過來,除去玻璃塞,水即流入瓶中,盛滿后,將瓶塞蓋好,再從水中取出,最好立即檢查,否則需放入冰箱中保存.
2.細菌總數測定
(1)自來水
1用滅菌吸管吸取l毫升水樣,注入滅菌培養皿中.共做兩個平皿.
2分別傾注約15毫升己溶化并冷卻到45攝氏度左右的肉膏蛋白胨瓊脂培養基,并立即在桌上作平面旋搖,使水樣與培養基充分混勻.
3另取一空的滅菌培養皿,傾注肉膏蛋白胨瓊脂培養基15毫升作空自對照.
4培養基凝固后,倒置于37攝氏度 溫箱中,培養24h,進行菌落計數.
5兩個平板的平均菌落數即為l毫升水樣的細菌總數.
(2)池水,河水或湖水等
1稀釋水樣 取3個滅菌空試管,分別加入9毫升滅菌水.取l毫升水樣注入第一管9毫升滅菌水內,搖勻,再自第一管取1毫升至下一管滅菌水內,如此稀釋到第三管,稀釋度分別為10-1,10-2與10-3.稀釋倍數看水樣污濁程度而定,以培養后平板的菌落數在30～300個之間的稀釋度最為合適,若三個稀釋度的菌數均多到無法計數或少到無法計數,則需繼續稀釋或減小稀釋倍數.
一般中等污穢水樣,取10-1,10-2,10-3三個連續稀釋度,污穢嚴重的取10-2,10-3 ,10-4三個連續稀釋度.
2自最后三個稀釋度的試管中各取l毫升稀釋水加入空的滅菌培養皿中,每一稀釋度做兩個培養皿.
3各傾注15毫升已溶化并冷卻至45攝氏度左右的肉膏蛋白胨瓊脂培養基,立即放在桌上搖勻.
4凝固后倒置于37攝氏度培養箱中培養24h.
3.菌落計數方法
(1)先計算相同稀釋度的平均菌落數.若其中一個平板有較大片狀菌苔生長時,則不應采用,而應以無片狀菌苔生長的平板作為該稀釋度的平均菌落數.若片狀菌苔的大小不到平板的一半,而其余的一半菌落分布又很均勻時,則可將此一半的菌落數乘2以代表全平板的菌落數,然后再計算該稀釋度的平均菌落數.
(2)首先選擇平均菌落數在30~300之間的,當只有一個稀釋度的平均菌落數符合此范圍時,則以該平均菌落數乘其稀釋倍數即為該水樣的細菌總數(見表26-1,例1).
(3)若有兩個稀釋度的平均菌落數均在30～300之間,則按兩者菌落總數之比值來決定.若其比值小于2,應采取兩者的平均數；若大于2,則取其中較小的菌落總數(見表26-l,例2及例3).
(4)若所有稀釋度的平均菌落數均大于300,則應按稀釋度最高的平均菌落數乘以稀釋倍數(見表26-l,例4).
(5)若所有稀釋度的平均菌落數均小于30,則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數(見表26-l,例5).
(6)若所有稀釋度的平均菌落數均不在30～300之間,則以最近300或30的平均菌落數乘以稀釋倍數(見表26-1,例6).